NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

（1.佛山科学技术学院动物医学系,广东佛山 528231;2.广东鹤山动物防疫监督所,广东鹤山 529700）

摘要：用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDV MM,NDV LD,NDV NH 3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota，F₄₈E₉的HI效价，以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照，分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明，NDV MM,NDV LD 2个野毒株HI效价与NDVLD HI效价相近，但比La Sota HI效价低2.3个~2.7个滴度；NDV NH与F₄₈E₉ HI效价相近，比La Sota HI效价低4.2个~4.3个滴度，提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明，经La Sota免疫（HI效价>2⁵）后攻毒保护率为80%～100%。

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病^[1]。世界动物卫生组织将其列为一类疫病，是危害养禽业的最重要疫病之一。新城疫病毒只有1个血清型，但存在毒力差异悬殊的不同毒株，从分子流行病学角度可分为9个基因型。新城疫流行已有70多年，20世纪30年代至50年代的大流行，主要由基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型毒株所致；20世纪60年代的大流行，主要由基因Ⅳ、Ⅴ毒株所致；20世纪70年代末的大流行，主要由基因Ⅴ、 Ⅵ型毒株所致；20世纪80年代大流行，主要由基因Ⅵ型毒株所致；20世纪90年代的大流行主要由基因Ⅵ、Ⅶ型毒株所致，尤其是1993年以后多由基因Ⅶ型毒株所致，并一直流行至今^[2]。新城疫分子流行病学的研究表明，新城疫的世界大流行与病毒的变异有着直接联系，每次流行都有新基因型的出现。近年来，我国流行的新城疫主要是由基因Ⅶ、Ⅸ和Ⅳ型引起的，其中基因Ⅶ型是最主要的流行株^[3-4]。

国内有报道，NDV抗原性发生了变异，用常规Ⅳ系疫苗株（基因Ⅲ型）免疫不能完全抵抗分离到的强毒株的攻击。本试验以抗La Sota阳性血清对La Sota毒株的HI效价为参照，用La Sota阳性血清测定野株毒NDV MM、NDV LD、NDV NH和参考株F₄₈E₉、La Sota的HI效价，分析3株新城疫强毒株与疫苗株的抗原交叉性，为评价常规疫苗免疫保护效果及制定防控措施提供科学依据。

1.1.2 病毒 NDV MM、NDV NH、MDV LD由本校畜牧兽医研究所分离鉴定，均为强毒株。标准毒株La Sota、F₄₈E₉购于中国兽药监察所。

1.2.1.1 病毒增殖将NDV MM、NDV LD、NDV NH、F₄₈E₉和La Sota株分别接种9日龄鸡胚，收获24 h后死亡鸡胚的尿囊液。

1.2.1.2 HA试验分别测定NDV MM、NDV LD、MDV NH及参考株La Sota、F₄₈E₉株的HA效价。

1.2.1.3 交叉HI试验用抗La Sota血清对La Sota毒株、F₄₈ E₉标准毒株，NDVMM、NDV LD、MDVNH分离株作HI试验。

1.2.2 免疫动物攻毒保护试验 40只健康黄鸡，1，25，35日龄3次免疫接种La Sota弱毒疫苗，50日龄检测血清HI滴度为2⁵～2⁷，用NDV MM、NDV LD、NDV NH毒株攻毒，0.2 mL/只，每组10只，10只鸡不攻毒作对照。

以同一份La Sota株阳性血清测定参考株NDVLa Sota、NDV F₄₈E₉和地方分离株NDV MM、NDV LD、NDV NH的HI效价，实验重复3次，取其3次平均值。参考株NDV La Sota、NDV F₄₈E₉和地方分离株NDV MM，NDV LD，NDV NH的HI效价分别为2¹¹，2^7.8，2^8.3，2^8.6和2^7.6。

NDV MM，NDV LD，NDV NH毒株攻击保护率分别为80%(8/10)，90%(9/10)，100%(10/10)。攻毒后对病死鸡剖检，病理变化主要为喉头和气管黏膜出血，十二指肠、小肠黏膜广泛性出血溃疡，盲肠扁桃体出血，泄殖腔黏膜出血、溃疡，其他器官未见异常。不攻毒的对照组全部健活。

新城疫病毒只有1个血清型，但各毒株间毒力差异较大，对不同毒株的差异性分析多采用毒力、蚀斑形成能力测定、血清中和能力等功能性试验来进行，而最具流行病学调查意义的是测定F基因重要功能区序列，构建系统发育树进行分子流行病学调查，分为9个基因型。本实验室郑法新^[5]应用DNAsis(version 2.0)软件，比较了 NDV LD，NDV MM与GenBank中的La Sota、TW 2000株的序列，并构建了系统发育进化树。结果表明，NDV LD与NDVMM同源性达96.6%，与我国台湾近年流行的毒株TW 2000同源性达95.0%，但与疫苗株La Sota核苷酸同源性只有63.7%。NDV MM、NDV LD具有基因Ⅶ强毒株特征，NDV NH与参考株F₄₈E₉均具有基因Ⅸ型毒株的特征。从本试验结果来看，基因Ⅶ型2株病毒NDVMM,NDV LD，而其HI效价相近；NDV NH,F₄₈E₉ 2株病毒均属基因Ⅸ型强毒株，其HI效价很接近。对各毒株进行血清学分析，其抗原相关性结果与F基因重要功能区序列同源性分析结果基本相符。

用抗La Sota血清对La Sota毒株的HI效价为2¹¹，而对NDVMM毒株的HI效价为2⁸。3，对NDV LD毒株的HI效价为2^8.6，对NDV NH毒株的HI效价为2^7.6，对F₄₈ E₉毒株的HI效价为2^7.8。表明La Sota的HI效价比NDV MM、NDV LD的HI效价高2.34个～2.67个滴度，比NDV NH、F₄₈E₉的HI效价高4.2个～4.3个滴度，而且经序列同源性分析NDV MM与NDV LD的F基因重要功能区同源性为96.6%，均属基因Ⅶ型，两者HI效价相近；NDV NH与F₄₈ E₉同源性为97.9%，均属基因Ⅸ型，其HI效价也相近。说明La Sota毒株与NDV MM、NDV LD、NDV NH、F₄₈E₉毒株抗原性存在较大差异。

从免疫动物攻毒保护试验结果来看，虽然La Sota毒株与NDV MM、MDVLD、NDVNH、F₄₈E₉毒株的抗原性存在差异，但La Sota免疫的鸡在抗体水平达25以上时，基本上能抵抗NDV强毒的攻击（保护率为80%～100%），说明NDV不同毒株虽然抗原性强弱及致病性有较大差异，但它们之间仍有较好的交叉保护性。

*收稿日期：2005-12-19

作者简介：黄良宗（1978-）,男，广东梅州人，助教，硕士，主要从事动物病原微生物与免疫学研究。