金钱豹猫瘟热疫苗免疫后血清抗体水平的检测

（1.成都市动物园，四川成都 610081；2.四川农业大学动物科技学院，四川雅安 625014）

摘要：金钱豹经2种猫瘟热灭活疫苗和1种弱毒疫苗免疫接种后，间隔不同的时间采血分离血清，用SPA-ELISA和HI两种方法测定猫瘟热血清抗体效价。结果猫瘟热灭活疫苗和弱毒疫苗均能有效诱导金钱豹产生较高效价的抗体，抗体持续时间相对较长。3种疫苗免疫效果比较显示，美国Fort Dodge猫三联灭活疫苗免疫效果最好。在猫瘟热血清抗体检测中，SPAELISA和HI的吻合率达到93％以上。

关键词：金钱豹；猫瘟热；酶标金黄色葡萄球菌A蛋白ELISA；血凝抑制试验

金钱豹分布于我国各地，在野外一般生活于海拔低的森林、山区、草地、丛林和荒漠地区。近年来由于野外栖息地大幅度缩小，特别是乱捕滥猎，致使其种群数量急剧下降^[1]。现在金钱豹已被列为世界濒危物种和我国一级保护动物及优先保护物种。由于金钱豹具有较高的观赏价值和药用价值，国内外对金钱豹进行了大量相关研究，领域涉及解剖、生理、饲养管理、繁殖和疾病防治等^[2-4]。猫瘟热是由猫细小病毒（Feline distemper virus,FPV）引起的一种以发热、发病初期白细胞显著减少、呕吐和腹泻为主要特征的高度接触性传染病^[5]。金钱豹对猫瘟热易感，感染后病程短，死亡率高，幼兽死亡率可达100%。目前国内外均采用定期进行免疫接种的方法来预防本病的发生，但接种后的野生动物仍时有本病发生。因此，在注射疫苗后动物体内是否产生免疫力、血清抗体滴度的高低以及抗体的持续时间等问题，均需要进一步的探讨。检测免疫接种动物血清抗体水平，是了解疫苗免疫效果的有效方法。为此，用SPAELISA和HI两种方法检测免疫接种后金钱豹血清抗体水平，同时分析两种检测方法的准确性和几种常用疫苗的免疫效果，为制定合理有效的免疫程序提供理论依据。

1．1．1 疫苗猫三联灭活疫苗（Feline Rhinotracheitis Calici Panleukopenia vaccine），美国FortDodge公司生产，1 mL/瓶，批号为162297A；猫瘟热弱毒疫苗，法国安万特公司生产，冻干苗（带稀释剂1 mL/瓶），批号为X0656-2；猫瘟热灭活疫苗（科研中试产品），6 mL/瓶，批号为20040315，购自军事兽医研究所。

1.1.2 诊断抗原的制备诊断抗原由本实验室保存的猫瘟热病毒毒株，经Vero细胞培养、收毒和浓缩后制备，抗原含量为1.197 mg/mL。

1.1.3 诊断血清的制备诊断血清用吉林大学农学部生产的猫瘟热灭活疫苗，经免疫家猫制备。

1.1.4 其他试剂猪红细胞用抗凝血，经3次洗涤后制成10 mL/L的猪红细胞悬液。HRPSPA酶标抗体购自上海欣科科技生物公司。

1.1.5 实验动物成都动物园饲养的成年金钱豹12只，临床健康。

1.2.1 试验设计将12只金钱豹随机分为3组，每组4只。第1组用军事兽医研究所猫瘟热灭活疫苗免疫，6 mL/只；第2组用美国FortDodge的猫三联灭活疫苗免疫，1 mL/只；第3组用法国安万特的猫瘟热弱毒疫苗免疫，1 mL/只；每组动物免疫1次。

免疫前和免疫后第5周，第14周，第23周和第36周分别麻醉金钱豹采血分离血清，用SPA-ELISA和HI两种方法测定3种疫苗诱导的血清抗体水平。

1.2.2 检测方法 SPAELISA参照文献[6-7]的方法进行。HI参照文献[6]和[8]的方法进行。

第1组免疫接种后第5周血清抗体平均OD值为0.568,第14周为0.480，第23周为0.413为;第2组第5周血清抗体平均OD值为0.493,第14周为0.503，第23周为0.458;第3组第5周血清抗体平均OD值为0.424,第14周为0.480，第23周为0.401（表1）。经t检验，第2组与第1组、第3组疫苗诱导产生的血清抗体效价间差异显著（P<0.05）;第1组与第3组间疫苗诱导产生的血清抗体效价差异不显著（P>0.05）。

疫苗种类 Kind of vaccine		OD
	编号	0周	5周	14周	23周	36周
	Number	0 Week	5 Weeks	14 Weeks	23 Weeks	36 Weeks
猫瘟热灭活苗 FPV killed virus vaccines	1	0.34	0.54	0.4	0.37	0.33
	2	0.34	0.45	0.37	0.37	0.38
	3	0.3	0.61	0.55	0.41	0.35
	4	0.39	0.67	0.6	0.5	0.49
	平均值Average	0.343	0.568	0.48	0.413	0.388
	平均值Average	0.343	0.568	0.48	0.413	0.388
猫三联苗 Feline Rhinotracheitis-Calici-Panleukopenia Vaccine	5	0.44	0.51	0.44	0.42	0.38
	6	0.38	0.41	0.51	0.47	0.42
	7	0.42	0.66	0.55	0.53	0.46
	8	0.3	0.39	0.51	0.41	0.38
	平均值 Average	0.385	0.493	0.503	0.458	0.41
猫瘟热弱毒苗 FPV living virus vaccines	9	0.38	0.42	0.6	0.42	0.38
	10	0.35	0.47	0.43	0.4	0.39
	11	0.38	0.41	0.45	0.4	0.39
	12	0.27	0.36	0.39	0.32	0.32
	平均值Average	0.344	0.424	0.48	0.401	0.378

疫苗种类 Kind of vaccine		HI值
疫苗种类 Kind of vaccine	编号 Number	0周 0 Week	5周 5 Weeks	14周 14 Weeks	23周 23 Weeks	36周 36 Weeks
猫瘟热灭活疫苗 FPV killed virus vaccines	1	1:2⁵	1:2⁹	1:2⁷	1:2⁶	1:2⁵
	2	1:2⁵	1:2⁷	1:2⁶	1:2⁶	1:2⁶
	3	1:2⁵	1:2¹⁰	1:2⁹	1:2⁷	1:2⁶
	4	1:2⁶	1:2¹¹	1:2¹⁰	1:2⁸	1:2⁷
猫三联灭活苗 Feline Rhinotracheitis-Calici-Panleukopenia Vaccine	5	1:2⁷	1:2⁹	1:2⁷	1:2⁷	1:2⁶
	6	1:2⁶	1:2⁷	1:2⁸	1:2⁸	1:2⁷
	7	1:2⁷	1:2¹¹	1:2⁹	1:2⁹	1:2⁸
	8	1:2⁵	1:2⁶	1:2⁹	1:2⁷	1:2⁶
猫瘟热弱毒疫苗 FPV living virus vaccines	9	1:2⁶	1:2⁷	1:2¹⁰	1:2⁷	1:2⁶
	10	1:2⁶	1:2⁸	1:2⁷	1:2⁶	1:2⁶
	11	1:2⁶	1:2⁷	1:2⁷	1:2⁶	1:2⁶
	12	1:2⁴	1:2⁶	1:2⁶	1:2⁵	1:2⁵

由表2可以看出,军事兽医研究所的猫瘟热灭活疫苗在第5周时血清抗体水平达到高峰，峰值相对最高，第14周左右开始下降；美国Fort Dodge猫三联灭活疫苗在第5周时血清抗体水平达到高峰，这种高抗体水平一直持续到第14周，到第23周左右开始平稳下降；法国安万特猫瘟热弱毒疫苗在14周左右时达到高峰，随后开始逐渐平稳的下降。

猫瘟热是对野生猫科动物威胁最大的传染病之一，已引起国内外兽医工作者的高度重视。国内外关于野生动物猫瘟热的研究报道很多，但大多都集中在病原学、流行病学及临床病例等方面，金钱豹等野生动物猫瘟热血清抗体方面的研究目前还未见报道。

SPA-ELISA和HI两种检测方法是临床上常用的检测方面，这两种检测方法简便，易操作，而且结果可靠。从试验结果可见，两者的吻合率达到93％（56/60），说明两种方法均适合用于猫瘟热血清抗体的检测。在用SPAELISA进行检测时，酶标板可用紫外线照射1 h，照射高度20 cm，照射后用戊二醛固定过夜^[5,9]，这样可提高酶标板对蛋白抗原的吸附能力，增加检测的敏感性。在做HI试验时，待检血清需经猪红细胞吸附，除去血液中的非特异性血凝物质，然后再用胰蛋白酶处理，除去非特异性血凝抑制物质。

本次试验结果显示，美国FortDodge猫三联灭活疫苗和军事兽医研究所的猫瘟热灭活疫苗，这两种FPV灭活疫苗免疫接种金钱豹后，金钱豹猫瘟热血清抗体水平在第5周左右达到高峰，较高的抗体滴度一直维持至第23周，到第36周时抗体水平开始下降；而法国安万特的弱毒疫苗免疫金钱豹后，金钱豹猫瘟热血清抗体滴度在14周左右时达到高峰，随后开始逐渐平稳的下降。灭活疫苗与弱毒疫苗这种抗体变化的规律符合两种不同性质疫苗的原理。

比较3种疫苗免疫效果，美国FortDodge猫三联灭活疫苗在第5周时血清抗体水平达到高峰，这种高抗体水平一直持续到第14周，到第23周左右开始平稳下降；军事兽医研究所的猫瘟热灭活疫苗在第5周时血清抗体水平达到高峰，峰值相对最高，第14周左右开始下降；法国安万特猫瘟热弱毒疫苗在14周左右时达到高峰，随后开始逐渐平稳的下降。从本次试验结果看，综合抗体产生速度、抗体高峰维持时间、抗体下降速度。因此，认为美国FortDodge猫三联灭活疫苗是3种疫苗中对金钱豹免疫效果最好的。

*收稿日期：2005-12-05

作者简介：赵波（1970-），男，四川古蔺人，主要从事野生动物疾病防治工作。