七彩山鸡附红细胞体与大肠埃希菌混合感染的诊断*

李少松，程光胜，胡拥军，王豪举^*

（西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400716）

摘 要：对某鸡场送检的病、死七彩山鸡进行实验室诊断,在血液中检查到附红细胞体；同时从心血、肝脏分离到1株革兰氏阴性短小杆菌，单个存在或2个～3个相连；经显微镜观察、培养特性和生化特性鉴定，确认为大肠埃希菌，该菌株可致死小鼠，对诺氟沙星、环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、阿米卡星和头孢唑啉钠等敏感。

关键词：附红细胞体；大肠埃希菌；七彩山鸡

2005年8月，重庆市某七彩山鸡养殖场饲养的1月龄七彩山鸡（已经进行了新城疫、传染性法氏囊病、鸡痘和传染性支气管炎等病的免疫接种）先后出现拉白色稀粪、厌食、精神委顿、两侧翅膀蓬松下垂、背部羽毛脱落，逐渐消瘦、死亡，每天死亡10只～30只。病理剖检见皮下出血，肝脏肿大、质脆、有点状坏死灶，心包有积液，脾脏肿大，肾脏肿大，有尿酸盐沉积，十二指肠黏膜有弥漫性出血点，盲肠扁桃体肿胀、出血。

   该场兽医先后使用氯霉素、磺胺类药物和痢特灵等均未能控制住病情，2月龄时累计病死率达80%。对病、死鸡进行血液原虫检查、病原分离培养及生化鉴定，确认为附红细胞体和大肠埃希菌混合感染。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 重庆市北碚区施家梁镇某七彩山鸡养殖场送检的病、死七彩山鸡各4只。

1.1.2 实验动物 小鼠10只，体重20 g±5 g，购自第三军医大学实验动物中心。

1.1.3 器材 微量发酵管购自北京路桥技术有限公司；药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司（原浙江省军区后勤部卫生防疫检验所）。

1.2 方法

1.2.1 病原分离

1.2.1.1 血液原虫检查 采血血液涂片染色镜检法，无菌采取活鸡翅下静脉血在载玻片上涂片，瑞氏染色，油镜观察^[1-2]。血液压片检查法，取灭菌生理盐水1滴于载玻片上，用接种环挑取无菌采集的待检血与载玻片上的生理盐水混匀，加上盖玻片油镜观察^[1-2]。

1.2.1.2 细菌分离培养 无菌采集病、死鸡肝脏、心血等组织，接种鲜血培养基和普通琼脂培养基，37 ℃培养24 h。挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板，于37 ℃培养24 h。

1.2.2 病原鉴定

1.2.2.1 形态学检查 心血涂片、肝脏触片经革兰氏染色镜检，纯培养物抹片、革兰氏染色镜检。

1.2.2.2 生化鉴定 进行糖发酵、酸类利用、酶类、硫化氢、MR和VP试验等^[3]。

1.2.3 动物试验 挑取单菌落接种于普通肉汤，37 ℃培养24 h。小鼠随机分为A、B两组，每组5只。A组为试验组，B组为对照组。A组腹腔接种分离菌肉汤纯培养物，每只0.5 mL；B组腹腔接种相同剂量的灭菌普通肉汤，隔离饲养，观察7 d。

1.2.4 药物敏感性试验 在普通琼脂培养基上按滤纸片扩散法进行^[4]，根据NCCLS标准判定结果。

2 结果

2.1 血液原虫检查结果

血液涂片经瑞氏染色后,在油镜下可见红细胞呈紫红色，部分红细胞上附着呈浅蓝色、球形或圆形的附红细胞体。

血液压片在油镜下，可见附着在红细胞上的附红细胞体和游离的附红细胞体呈翻滚或扭转运动，折光性很强,有蓝色荧光,而被附红细胞体感染的红细胞呈星芒状、菠萝状和不规则形状。

2.2 细菌分离培养结果

在普通琼脂平板上37 ℃培养24 h后，形成中等大小、圆形微凸起、表面光滑湿润、浅灰色半透明菌落。在麦康凯琼脂平板上，形成中等大小、表面光滑湿润的粉红色菌落。

2.3 病原鉴定结果

2.3.1 细菌形态学观察结果 心血涂片、肝脏触片在油镜下可观察到革兰氏阴性的短小杆菌；纯培养物在油镜下可见革兰氏阴性的短小杆菌，大多散在，少数呈2个～3个相连排列存在，其形态、染色与心血涂片、肝脏触片中细菌一致。

2.3.2 生化鉴定结果 该菌可分解葡萄糖乳糖、麦芽糖、果糖、棉实糖、甘露醇、卫矛醇、产酸产气；MR、赖氨酸脱羧酶等试验为阳性；蔗糖、阿拉伯糖、VP、H₂S、枸橼酸盐、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶等试验为阴性。其生化特性与大肠埃希菌生化特性一致，确定为大肠埃希菌。

2.4 动物试验结果

A组小鼠24 h内死亡2只，剖检见肝脏肿大、有出血点；肠臌气，肺出血，脾脏淤血。另外3只精神委顿、厌食，4 d后恢复正常。采取A组死亡小鼠的心血、肝和脾接种在普通琼脂培养基37 ℃培养24 h，有细菌生长，菌落形态及细菌革兰氏染色镜检与普通肉汤中接种的细菌相同，表明该菌对小鼠具有一定致病力。B组小鼠饲养7 d无异常情况，剖检未见病变。

2.5 药敏试验结果

10种药物药敏试验结果见表1。

表1 分离菌的药敏试验结果

Table 1 Results of the sensitivitiies of isolated E.coli to antibiotics

通过查阅NCCLS标准可知，此次分离的大肠埃希菌对诺氟沙星、环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、阿米卡星、头孢唑啉钠敏感，对氨苄西林和红霉素耐药，青霉素和复方新诺明对分离菌完全没有抑菌作用。

3 讨论

3.1 根据血液涂片、压片镜检可确定该鸡群有附红细胞体感染；心血涂片、肝脏触片以及病原菌的分离鉴定表明鸡群同时感染大肠埃希菌。药物敏感性试验表明该株大肠埃希菌对氯霉素敏感，但该鸡场在发病初期使用氯霉素未能控制病情，在一定程度上说明鸡群并非单一的大肠埃希菌感染。磺胺类药物对附红细胞体有一定治疗效果^[5]，发病初期该鸡场单纯使用磺胺类药物同样未能取得疗效，说明该鸡群可能同时感染其他病原。从以上两点分析来看，该鸡群为附红细胞体与大肠埃希菌混合感染。在之后的治疗方案建议该鸡场同时使用庆大霉素、血虫净、长效土霉素等药物^[5]，死亡及发病情况得到了有效的控制，2周后发病鸡基本康复，再未出现死亡。进一步说明此次发病为附红细胞体与大肠埃希菌混合感染。

3.2 附红细胞体病（Eperythrozoonosis）是由附红细胞体寄生于人畜红细胞表面、血浆及骨髓中而引起的一种人畜共患传染病^[6]。本病多为隐性感染，据报道^[7]家畜隐性感染率马为95.8%，骡为85.7%，猪为95%，牛为80%，绵羊为88%，兔为66%，山羊为82%，奶山羊为100%，鸡为75%。在某些因素影响下，呈急性爆发，以高热、贫血和黄疸为主要症状。重庆地区夏秋交接季节高温、多雨，天气闷热、潮湿、蚊虫多，而七彩山鸡散养条件下不易管理，极易造成应激、感染疾病，导致抵抗力下降从而引起附红细胞体病的发生。

3.3 在饲养环境差、免疫、气温变化等应激因素的影响下，鸡群抵抗力下降，容易导致致病性大肠埃希菌侵入体内，造成感染发病^[8]。在鸡群发生附红细胞体等疾病的情况下，机体抵抗力下降，更是为致病性大肠埃希菌等打开了门户。

 3.4  从本次诊断治疗来看，对于散养的禽类应该做好以下几点预防工作：①加强平时的饲养管理，保持鸡群有较高的健康水平，以抵御病原的侵害；②定期作好驱虫工作，有条件的可以定期检测，如附红细胞体感染水平； ③饲养场地、饮水饲喂器械等要定期消毒；④做好灭蚊、虫、鼠的工作，防止麻雀等野鸟进入饲养场地；⑤如果鸡场有大量鸡只发病时，应尽快防治，就近请当地兽医部门或科研部门帮助指导工作，减少损失。同时可以避免乱用药和耐药菌株产生，保证以后的安全生产。

参考文献（略）